04-002-1A BI ES級(jí)別胎牛血清|*

產(chǎn)品名稱(chēng)：ES級(jí)別胎牛血清

英文名稱(chēng)：Certified Fetal Bovine Serum, Qualified for Human Embryonic Stem Cells

貨號(hào)：04-002-1A

品牌：BI

規(guī)格：500ML

等級(jí)：優(yōu)等

庫(kù)存狀態(tài)：現(xiàn)貨

Product Overview

Embryonic Stem (ES) Cells are pluripotent cells derived from the inner cell mass of the blastocyst. The stem cells can be maintained in vitro for extended periods without loss of their capacity to differentiate to all cell lineages when reimplanted back into a blastocyst. ES cells may differentiate in vitro to a variety of cell types including neuronal, muscle, endothelial and hematopoietic progenitors. General culture conditions are well established and usually require ES cells to be grown on an inactive feeder cell layer or with basement membrane components (Matrigel, Fibronectin, Laminin). When growing ES cells, one of the most important parameters is the maintenance of the cells in the undifferentiated state. Pre-screening of the serum is essential before using it for the culture of ES cells. Various lots of sera are screened for the growth of Human ES cells using MEF's as a feeder layer.

The following parameters are measured for the screening:

Human ES cells colony morphology

Plating efficiency

Differentiation rate: analysis of Human ES cells surface marker expressed on the undifferentiated cells membrane (FACS analysis).

The results are used as an indication of the quality of sera for the growth and maintenance of undifferentiated stem cells.

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1、 如何儲(chǔ)存和解凍血清才不會(huì)使產(chǎn)品質(zhì)量受損？
將血清從冷凍箱取出后，先置于2～8℃冰箱使之融解，然后在室溫下使之全融。但必須注意的是，融解過(guò)程中必須規(guī)則地?fù)u晃均勻。長(zhǎng)時(shí)間儲(chǔ)存在2－8℃時(shí)，血清中的各種蛋白和脂蛋白（如冷凝集素、纖維蛋白原、玻粘連蛋白等）可能聚集而形成沉淀或可見(jiàn)的混濁。因此，推薦在-20℃以下儲(chǔ)存血清，并避免反復(fù)凍融。我們建議血清應(yīng)保存在-2O℃。若存放于4℃時(shí)，請(qǐng)勿超過(guò)一個(gè)月。若一次無(wú)法用完一瓶，建議無(wú)菌分裝血清至恰當(dāng)?shù)臏缇萜鲀?nèi)，再放回冷凍。

2、血清中包含絮狀沉淀，它們是什么，怎么處理？
沉淀包含纖維蛋白和脂蛋白。這是正常特性，不會(huì)影響產(chǎn)品性質(zhì)。要除去沉淀，離心血清（400g，1-2分鐘）或者簡(jiǎn)單的讓其沉淀在瓶子底部，將血清小心的轉(zhuǎn)移到另一個(gè)無(wú)菌瓶里（一般不建議采用過(guò)濾的方法除去沉淀，因?yàn)槌恋頃?huì)堵塞濾膜而無(wú)法過(guò)濾）。大多情況輕輕搖動(dòng)沉淀并加熱至37℃就會(huì)再溶解。所以，使用產(chǎn)品時(shí)要搖動(dòng)并加熱血清至37℃，沉淀會(huì)自然消失。

4、 如何避免血清中產(chǎn)生沉淀？
按如下操作可避免沉淀的產(chǎn)生：
（1）解凍血清時(shí)，請(qǐng)隨時(shí)將之搖晃均勻，使溫度及成分均一，減少沉淀的發(fā)生。
（2）血清分裝凍存時(shí)，須規(guī)則搖晃均勻（小心勿造成氣泡），使溫度與成分均一。
（3）勿直接由-20℃直接至37℃解凍，因溫度改變太大，容易造成蛋白質(zhì)凝結(jié)而發(fā)生沉淀。
（4）勿將血清置于37℃太久，否則血清會(huì)變得渾濁，同時(shí)血清中許多較不穩(wěn)定的成份也會(huì)因此受到破壞，從而影響血清的品質(zhì)。
（5）血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多，若非必要，可以無(wú)須做此步驟。
（6）若必須做血清的熱滅活，請(qǐng)遵守56℃，30分鐘的原則，并且隨時(shí)搖晃均勻。溫度過(guò)高，時(shí)間過(guò)久或搖晃不均勻，都會(huì)造成沉淀物的增多。

5、 培養(yǎng)基中添加了血清和抗生素后，可長(zhǎng)期保存嗎？

一旦您在新鮮培養(yǎng)基中添加了血清和抗生素時(shí)，您應(yīng)該在兩到三周內(nèi)使用它。因?yàn)橐恍┛股睾脱逯械幕境煞衷诮鈨龊缶烷_(kāi)始降解。

6、 為什么要熱滅活血清?

加熱可以滅活補(bǔ)體系統(tǒng)。激活的補(bǔ)體參與溶解細(xì)胞事件，刺激平滑肌收縮，細(xì)胞和血小板釋放組胺，激活淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞。在免疫學(xué)研究，培養(yǎng)ES細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞時(shí)，推薦使用熱滅活血清。

7、 有必要做熱滅活嗎?

實(shí)驗(yàn)顯示，經(jīng)過(guò)正確處理的熱滅活血清，對(duì)大多數(shù)的細(xì)胞而言是不需要的。經(jīng)此處理過(guò)的血清對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)只有微小的促進(jìn)，或*沒(méi)有任何作用，甚至通常因?yàn)楦邷靥幚碛绊懥搜宓馁|(zhì)量，而造成細(xì)胞生長(zhǎng)速率的降低。而經(jīng)過(guò)熱處理的血清，沉淀物的形成會(huì)顯著的增多，這些沉淀物在倒置顯微鏡下觀察，像是“小黑點(diǎn)”，常常會(huì)讓研究者誤以為是血清遭受污染，而把血清放在37℃環(huán)境中，又會(huì)使此沉淀物更增多，使研究者誤認(rèn)為是微生物的分裂擴(kuò)增。若非必須，可以不需要做熱處理這一步。不但節(jié)省時(shí)間，更確保血清的質(zhì)量!

8、細(xì)胞培養(yǎng)中出現(xiàn)黑點(diǎn)是污染嗎？如何處理？

一旦您在細(xì)胞培養(yǎng)的過(guò)程中發(fā)現(xiàn)有黑點(diǎn)生成，首先，要肉眼觀察培養(yǎng)基是否混濁，然后，在鏡下觀察培養(yǎng)細(xì)胞生長(zhǎng)的狀態(tài)，黑點(diǎn)是否游動(dòng)。如果細(xì)胞被污染，微生物則會(huì)大量繁殖，培養(yǎng)基就會(huì)迅速變黃、變混濁。污染包括細(xì)菌污染、支原體污染等。如果在鏡下觀察細(xì)胞，生長(zhǎng)狀態(tài)良好，與黑點(diǎn)出現(xiàn)前相比，沒(méi)有任何變化，那么，黑點(diǎn)的出現(xiàn)可能與以下幾種情況有關(guān)：（1）細(xì)胞生長(zhǎng)過(guò)老，破碎的細(xì)胞殘??；（2）血清質(zhì)量不好，反復(fù)凍融的結(jié)果；（3）配制培養(yǎng)基的pH值偏高，不宜細(xì)胞生長(zhǎng)；（4）配制培養(yǎng)基的水質(zhì)、容器不合格?？蓱?yīng)用離心、過(guò)濾的方法去除這些黑點(diǎn)；（5）培養(yǎng)原代細(xì)胞中出現(xiàn)小黑點(diǎn)，可能是原代組織中的雜質(zhì)，多次傳代可以消除。

9、 細(xì)胞培養(yǎng)中如何防止黑點(diǎn)生成？
（1） 盡可能地減少血清凍融次數(shù)。
（2） 培養(yǎng)基無(wú)需37℃水浴。
（3） 培養(yǎng)基保持*PH值7.0- 7.2。
（4） 嚴(yán)格控制配制培養(yǎng)基的水質(zhì)，容器定期刷洗。
（5） 掌握細(xì)胞傳代的*時(shí)機(jī)，細(xì)胞切勿生長(zhǎng)過(guò)老。

使用前處理：大部分血清在使用前必須滅活處理，即56℃30分鐘。滅活的目的是去除血清中的補(bǔ)體成分，避免補(bǔ)體對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生毒性作用。血清經(jīng)過(guò)滅活也會(huì)損失一些對(duì)細(xì)胞有利的成分，如生長(zhǎng)因子，因此也有人提出血清不經(jīng)滅活直接用于培養(yǎng)，這樣做的前提是確認(rèn)血清中不含補(bǔ)體成分。對(duì)于一些品質(zhì)高的胎牛血清和新牛血清可以考慮不經(jīng)滅活直接用于細(xì)胞培養(yǎng)。

儲(chǔ)存條件：血清一般儲(chǔ)存于－20℃，同時(shí)應(yīng)避免反復(fù)凍融。購(gòu)買(mǎi)大包裝的血清后，首先要滅活處理，然后分裝成小包裝，儲(chǔ)存于－20℃，使用前融化。融化時(shí)zui好現(xiàn)置于4℃。融化后的血清在4℃不宜長(zhǎng)時(shí)間存放，應(yīng)盡快使用。

使用濃度：自從有了合成培養(yǎng)基，血清就是作為一種添加成分與合成培養(yǎng)基混合使用，使用濃度一般為5－20％，zui常用是10％。過(guò)多血清容易使培養(yǎng)中的細(xì)胞發(fā)生變化，特別是一些二倍體的無(wú)限細(xì)胞系，迅速生長(zhǎng)之后容易發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化。

采購(gòu)血清時(shí)，zui好先從供應(yīng)商處索取樣品進(jìn)行試驗(yàn)，選定一批后就要保留足夠使用6個(gè)月至1年的量，直至用另一批經(jīng)過(guò)預(yù)先試驗(yàn)的樣品代替。

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